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    亮發光桿菌菌種如何證明進行了傳代

    點擊次數:1424  更新時間:2017-02-07

    亮發光桿菌菌種如何證明進行了傳代
    1.菌種是從事微生物學及生命科學研究的基本材料,亮發光桿菌在醫學領域中,診斷制品的制備,菌苗的、微生物致病性研究,藥物的抑菌試驗及藥品微生物檢驗等都有一套完整的菌種.微生物具有生命活力,在傳代過程中易發生變異甚至死亡,因此菌種傳代與保藏是一項重要的基礎工作。
    2.把凍干菌種管、滅菌1ml滴管、雙碟、鑷子、營養肉湯培養基、營養瓊脂斜面數支,移入接種室或凈化工作臺。
    3.先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕,再將凍干菌種管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干,用75%乙醇棉擦凈,放在滅菌雙碟內,待干。點燃酒精燈,將菌種管的封口一端在火焰上,燒灼紅熱,滴在灼熱的菌種管封口一端,使驟冷而炸裂。
    4.取滅菌鑷子,在火焰旁,將炸裂的管口打開,放入滅菌雙碟內,另取1支滅菌滴管,在火焰旁吸取營養肉湯少許,加至菌種管底部,將凍干菌攪動促使溶解,隨即吸出管內菌液,亮發光桿菌分別接種至營養瓊脂斜面及普通肉湯內,并將滴管及菌種管投入消毒液內,將已接種的營養肉湯及營養瓊脂斜面進行培養。
    5.點燃酒精燈,用左手握住菌種斜面,將管口靠進火焰旁,右手拿接種棒后端,將接種環燒紅30秒,隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼,往返通過3次。左手將管口在火焰上旋轉燒灼,右手用無名指、小指及掌部夾住棉塞,撥開棉塞,將接種環伸人管內先在近壁的瓊脂斜面上靠一下,稍冷卻再移至菌苔上,刮去少量菌苔,隨即取出接種棒,并將菌種管口移至火焰旁。
    6.堵上棉塞,左手將菌種管放下,取營養瓊脂斜面1支,照上述操作打開棉塞,將接種環伸入管內至瓊脂斜面的低部,由底向上,將接種環輕貼斜面的表面曲折移動,使細菌劃在斜面的表面上。

    7.菌種斜面傳代操作
    8.培養基應新鮮制備,如斜面已無冷凝水者,不宜再使用。標簽上注明菌種名及菌種編號。至冰箱取出的菌種斜面,應在室溫放置約30分鐘,待溫度平衡后再移入接種室或超凈工作臺。
    9.取出接種棒,在火焰旁將培養基管棉塞堵上,然后將接種過細菌的接種棒在火焰上燒灼滅菌。
    10.菌種的培養與保存
    11.大腸桿菌35~37℃培養48小時
    金黃色葡萄球菌30~35℃培養48小時枯草芽孢桿菌30~35℃培養48小時白色念珠菌23~28℃培養7天黑曲霉23~28℃培養7天
    12.將培養物管自培養箱取出后放人冰箱(2-8℃)保存,一般2個月轉種一次。4.5菌液的制備
    13.取上述培養好的營養肉湯菌懸液(濃菌液)1ml,加到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液混勻,為10-1,再取另一只刻度吸管吸取10-1菌液1ml加到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液混勻,為10-2……以此類推,稀釋至含活菌數在50~100個。用平板計數。

    14.取上述培養好的菌種斜面移入接種室或凈化工作臺,放置室溫后,用接種環取菌苔少許接種置營養肉湯中(10ml/支,已滅菌),將已接種畢的細菌管置35℃~37℃培養18~24小時,取出備用。一般于冰箱中保存可用兩周。
    15.此稀釋菌液用于試驗后加陽性對照,可在一周內使用。
    16.傳代和接種使用后,亮發光桿菌應做好《菌種傳代接種記錄》。
     

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