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    發光菌的生物毒性測試實驗步驟

    點擊次數:2501  更新時間:2017-03-16

    1.亮發光桿菌菌種準備

    1) 發光細菌新鮮菌懸液的制備

    (1) 斜面菌種培養。于測定前48h取保存菌種,于新鮮斜面上接出*代斜面,(20±0.5)℃培養24h立即轉接第二代斜面,(20±0.5)℃培養12h,再接出第三代斜面,(20±0.5)℃培養12h后備用。每次接種量不超過1接種耳。

    (2)搖瓶菌液培養。取第三代斜面菌種近1環,幾接種于裝有50mL培養液的250mL三角瓶內,(20±0. 5) ℃ ,184r/min下培養 12-14h,備用。

    (3) 將培養液稀釋至每毫升108一109個細胞,初始發光度不低于800mV,置冰浴中備用。

    2)菌液復蘇

    取冷藏的發光菌凍干粉,置冰浴中,加入0. 5mL冷的2 % NaCl溶液,充分搖勻,復蘇2min,使其具有微微綠光,初始發光度不低于800mV。

    2.樣品采集與處理

    1) 水樣

    (1) 從不同工業廢水的各排放口,每4h采樣一次,每次取樣后于4℃保存,連續采集24h后,均勻混合后備用。

    (2) 納污水體取其入口、中心、出口三個斷面混合水樣備用。

    (3)以同上方法采集清潔水,作空白對照。

    濁度大的污水,需靜置后取上清液。一般樣品不需加任何處理。水樣按3%比例投加NaCl,置冰箱備用。

    2) 氣體樣品

    以大氣采樣法采取一定體積的大氣樣品,通過氣體吸收液((5mL)中吸收,按3%比例投加NaCl,置冰箱備用,同法收集清潔空氣作為對照組。

    3) 固體樣品

    取固體廢棄物,按《工業固體廢棄物有害特性試驗與監測分析方法》制備浸出液,取上清液,按3%比例投加NaCl,置冰箱備用。

    3.亮發光桿菌實驗濃度的選擇

    在預備實驗的濃度范圍內,按等對數間距或百分濃度取3-5個實驗濃度,同時設空白對照和參比毒物系列濃度組。

    4.發光細菌法生物毒性瀏定

    1) 工業廢水或有毒物質的生物毒性測定

    (1) 發光菌懸液初始發光度測定。取4. 9mL 3%NaCl溶液于比色管內,加新鮮發光菌懸液或凍干粉復蘇菌懸液10μL,若測量發光度在800mV以上,允許置冰浴中備用。

    (2) 取已處理待測廢水樣品,按等對數間距或百分濃度編號,并注明采集點。

    (3) 按表4-40-1依次加入稀釋液,待測水樣及參比毒物系列濃度溶液。

    (4) 打開生物毒性測試儀電源,預熱15min,調零點,備用。

    (5) 每管加入菌懸液10μL,準確作用5 min或15min,依次測定其發光強度,記錄毫伏數。

    每個濃度設3管重復。

    2) 工業廢氣(或有害氣體)的生物毒性測定

    (1) 氣體直接通入法。用注射器直接注入氣體于菌懸液中,經10-20min測定發光菌強度的變化。

    (2) 氣體吸收法。方法同工業廢水測定法。

    (3) 固體亮發光桿菌落法。挑選固態培養對數生長期的發光菌單菌落,連同培養基切下,置比色管內,測定初始發光強度,然后用注射器將待測氣體注入菌苔表面,經10-20min后,測定發光度的變化。

     

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