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    人心肌細胞鑒定試劑盒細胞培養方法

    點擊次數:876  更新時間:2023-05-25

    人心肌細胞鑒定試劑盒細胞培養方法;

    1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代

    ①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

    ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;

    ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;

    ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

    ⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;

    ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

    2、細胞復蘇:

    ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。

    ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。

    3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

    ①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)

    ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;

    ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;

    ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

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