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    細胞內還原型谷胱甘肽((GSH)的測定

    點擊次數:8209  更新時間:2015-12-21

    (一)原理

        細胞內還原型谷胱甘肽((GSH)可保護細胞免受損傷,藥物或毒物可通過使細胞內GSH耗竭而導致細胞受損。

    (二)材料

    1.96孔培養板培養的待測細胞與對照組細胞。

    2.O.1mol/L PBS(pH8.0) 0.1mol/L Na2HPO4溶液170ml和O.1mol/L NaH2PO 4溶液34ml混勻。

    3.DTNB溶液用0.1mol/L PBS配成6.5%TCA溶液。

    (三)方法

        培養細胞的96孔培養板,傾去培養液,加入O.1mol/L PBS洗滌各孔,倒掉PRS,加入6.5%TCA 0.05ml,4℃放置30min,再加入0.25ml的DTNB溶液,10min后在420nm處比色。

    (四)結果

        可計算受試物組細胞GSH的相對含量(%)

        細胞GSH的相對含量越高,則細胞毒性越低;細胞GSH的相對含量越低,則細胞毒性越高。也可計算細胞GSH的含量,但要先繪制GSH的標準曲線,方法類似于蛋白質標準曲線。

    (五)注意事項

        若細胞在24孔培養板或6孔培養板上培養,可將細胞刮下來,經超聲破碎或用溶解液溶解,再測定GSH量,但在96孔培養板上培養則不必刮細胞,可直接經6.5%TCA提取GSH,直接比色。

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